作者：勵合
2020-01-01
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品牌：基華
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促銷價：
產(chǎn)品說明
BL21是早開發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達(dá)菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá)，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達(dá)(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)（如：pGEX，pMAL質(zhì)粒）。
基因型
E.coli B F-dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
操作方法
1. BL21感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速[敏感詞]冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項
1. 感受態(tài)細(xì)胞[敏感詞]在冰中緩慢融化，[敏感詞]冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
4. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。
5. 為獲得需要量的蛋白，[敏感詞]誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。
