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2018-05-15
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Ni柱的使用與保養(yǎng)
1. 對(duì)于一般的預(yù)裝柱（Crude系列除外），上樣前，樣品需要使用0.22μm/0.45μm濾膜進(jìn)行過濾或者離心處理，以避免樣品中有細(xì)胞碎片等固體物質(zhì)，堵塞柱子。
2. 如果細(xì)胞裂解后非常粘稠，需考慮是否因?yàn)镈NA、RNA這類核酸物質(zhì)過多，需要加入核酸酶去除，以降低樣品粘稠度，提高上樣速度及洗脫效果。
3. 柱子使用過程中，不能超過填料的壓力，以免填料被壓塌。
4. 每次使用后，可使用5-10倍柱體積的純水或者結(jié)合緩沖溶液對(duì)柱子進(jìn)行清洗。（如果出現(xiàn)載量嚴(yán)重下降或者壓力增加，需考慮徹底清洗）
CIP（徹底清洗）
常規(guī)柱子（除了Ni excel）如出現(xiàn)反壓嚴(yán)重升高或者柱子明顯顏色改變，說明柱子需要進(jìn)行徹底的清洗。
1. 脫鎳：
(1) 脫鎳緩沖液：20mM 磷酸緩沖液，0.5M NaCl，50mM EDTA，pH 7.4。
(2) 使用5-10個(gè)柱體積的脫鎳緩沖液沖洗柱子，
(3) 然后再用5-10個(gè)柱體積的水沖洗柱子。
2. 去除沉淀蛋白、疏水性蛋白及脂蛋白：將柱子置換到1M NaOH中，室溫1-2小時(shí)（若需要去除內(nèi)毒素可延長(zhǎng)至12小時(shí)），再用5-10個(gè)體積去離子水沖洗。
3. 去除強(qiáng)離子吸附蛋白：使用1.5M NaCl洗柱子，約10-15分鐘，然后用大約10個(gè)體積去離子水沖洗。
4. 掛鎳：加入0.5ml（1ml柱子）或者2.5ml（5ml柱子）0.1M的NiSO4，使用5個(gè)柱體積的去離子水沖洗，再用緩沖液沖洗5個(gè)柱體積，后置換到20%乙醇中保存。
Ni excel系列
可以定期使用NaOH進(jìn)行徹底的在位清洗。使用NaOH能夠比較徹底地清除各類蛋白的雜質(zhì)，便于延長(zhǎng)柱子的使用壽命。使用不同樣本中間，加入洗滌步驟，可以避免互相之間的交叉污染。具體清洗步驟如下：
1. 針對(duì)強(qiáng)離子結(jié)合的蛋白，用1.5M NaCl 清洗多個(gè)柱體積，再用用約10個(gè)柱體積的去離子水或者平衡緩沖液清洗。
2. 針對(duì)沉淀蛋白、疏水性蛋白、脂蛋白，用1M NaOH保存柱子1-2小時(shí)（如果需要去內(nèi)毒素，可以延長(zhǎng)至12-24小時(shí)），再用約10個(gè)體積的去離子水或者平衡緩沖液沖洗。
3. 針對(duì)強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白、脂類，使用5-10個(gè)柱體積的30%異丙醇沖洗約15-20分鐘，再用10個(gè)柱體積的去離子水或者平衡緩沖液沖洗。
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