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品牌：基華
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產品說明

BL21是早開發(fā)的用于原核表達的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動子驅動的蛋白表達(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達（如：pGEX，pMAL質粒）。

基因型

E.coli B F-dcm ompT hsdS(r_B^- m_B^-) gal [malB⁺]_K-12(λ^S)

操作方法

1. BL21感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速[敏感詞]冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞[敏感詞]在冰中緩慢融化，[敏感詞]冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，[敏感詞]誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。