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暢銷產(chǎn)品
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DH5α

AuthorAuthor:勵(lì)合

2020-01-01

1974Secondary browse


品牌:基華
貨號(hào):
規(guī)格:
促銷價(jià):



產(chǎn)品說明

DH5α菌株是實(shí)驗(yàn)室常用的感受態(tài)細(xì)胞。 缺失核酸內(nèi)切酶 (endA),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型 (recA)減少[敏感詞]片段的同源重組概率,保證了[敏感詞]DNA 的穩(wěn)定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)、白斑篩選。

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

操作方法

1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速[敏感詞]冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。 

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞[敏感詞]在冰中緩慢融化,[敏感詞]冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。 
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

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